Koncentracije izvlečkov žajblja in fenolnih kislin so preračunane v mg protimikrobne snovi/mL gojišča TSB, zato, da so rezultati primerljivi med metodami.

V aseptičnih razmerah smo odmrznjene izolate prenesli v epruveto, v kateri je bilo 4 ml tekočega gojišča TSB ter premešali na vrtinčnem mešalu.

Testiranje variante zCIM, ki jo uporabljamo za testiranje enterobakterij je potekalo tako, da smo v epruveto dodali 0,4 mL tekočega gojišča TSB (angl.

Test izvajamo z uporabo tekočih mikrobioloških gojišč: tioglikolatnega in triptičnega sojinega gojišča (TSB, ang. tryptic soy broth).

Priprava inokuluma: inokulum smo pripravili tako, da smo v sterilno stekleno epruveto s pokrovčkom odmerili 10 mL tekočega gojišča TSB oz.

Izvedli smo elektroporacijo in v kiveto dodali 1 mL tekočega gojišča TSB, premešali in vse skupaj prenesli v sterilno 5-mL centrifugirko.

Sterilnost zobnih ploščic so preverili tako, da so vsako ploščico aseptično potopili v 5 ml sterilnega tekočega gojišča TSB.

V prvi stolpec smo v osmih ponovitvah odpipetirali po 100 µL gojišča TSB, ki je služilo tudi kot interna kontrola sterilnega dela.

V centrifugirko s pokrovom smo odpipetirali 5 mL gojišča TSB in z ezo iz plošče prenesli 6 posameznih kolonij v gojišče.

Za pripravo bakterijskega inokuluma smo za vsak sev posebej v sterilne 15 mL centrifugirke odpipetirali 1 mL sterilnega tekočega gojišča TSB.

Mikrotitrsko ploščico smo napolnili tako, da smo v vse luknjice, razen v prvo vrstico, odpipetirali 50 µl gojišča TSB.

Če je bilo potrebno, smo kulturo redčili tako, da smo odpipetirali 1 ml in ji dodali 4 ml gojišča TSB.

V epruvete smo najprej odpipetirali 9 ml tekočega gojišča TSB , nato smo dodali ustrezen volumen ekstrakta in nazadnje še 1 ml kulture ( 10 - 1 ) .

Poleg vzorcev smo pripravili kontrole tako , da smo v 9 ml gojišča TSB dodali 0,5 ml kulture in 0,5 ml sterilne destilirane vode .

Dodatek gojišča in inokuluma: zatehtani testirani snovi smo dodali 4 mL tekočega gojišča TSB oz.

Nato smo s slamico kulturo iz trdnega gojišča prenesli v 5 mL tekočega gojišča TSB.

Nato smo odstranili supernatant ter pelet celic raztopili celic v 1,5 mL svežega tekočega gojišča TSB.

V mikrotitrsko ploščico smo v vsako luknjico, razen v zadnjo vrstico odpipetirali 50 µl gojišča TSB.

V mikrotitrsko ploščico smo v vsako luknjico razen v zadnji stolpec odpipetirali 50 µl gojišča TSB.

Posamezno kolonijo vsakega seva smo precepili v 10 mL tekočega gojišča TSB in inkubirali 48 h pri enakih pogojih.